JPD编辑优选:光学超分辨与光切片融合的结构光照明显微成像技术

14 5月 2021 gabriels

本篇研究来自中国科学院西安光学精密机械研究所姚保利研究员课题组,本工作揭示了超分辨SIM(SR-SIM)理论和光切片SIM(OS-SIM)理论的内在联系,建立了超分辨与光切片融合的iSIM理论,获得了普通生物厚样品的高信噪比超分辨显微图像。


文章介绍

Super-resolution and optical sectioning integrated structured illumination microscopy

Dan Dan(但旦), Peng Gao(郜鹏), Tianyu Zhao(赵天宇), Shipei Dang(党诗沛), Jia Qian(千佳), Ming Lei(雷铭), Junwei Min(闵俊伟), Xianghua Yu(于湘华), Baoli Yao(姚保利).

通讯作者:

  • 姚保利,中国科学院西安光学精密机械研究所
本工作从SR-SIM成像理论模型着手,在其基础上增添了离焦背景干扰项。通过详细推导,揭示了离焦背景干扰项在SR-SIM频谱扩展中的角色——它只会影响低频的中间频谱,却不会影响扩展的高频频谱(图1);同时推导还发现了高频扩展频谱与OS-SIM图像存在等同的数学表达形式,由此建立了SR-SIM与OS-SIM的理论联系,从而使这两种技术的成像优势能够融合(iSIM),最终得到了具有超分辨的光切片。

图1. iSIM频谱融合方法与传统方法示意图

本工作设计了显微成像模拟模型以验证iSIM理论的正确性。模型以Ground Truth图像垂直中线开始,朝图像两端逐渐模糊,模糊程度与离开中线的距离成正比。基于此模型,模拟产生了物镜景深造成的在焦和离焦效果。通过在模型上实施iSIM、普通宽场、OS-SIM、SR-SIM成像,对比展现了iSIM既能超分辨又能避免离焦干扰的成像优点(图2)。

图2. iSIM与普通成像、OS-SIM、SR-SIM的模拟成像对比

实验进一步验证了iSIM理论的成像有效性。实验光路使用空间光调制器(SLM)加载光栅相位,令衍射的±1级光束干涉产生结构照明条纹。为了实现SIM所需的条纹方向旋转,并简化光束偏振态控制,实验将光束调制成圆偏振态进行干涉(图3)。以人视网膜色素上皮细胞(HRPE)为样品,通过与普通宽场、OS-SIM和SR-SIM成像对比,证实了iSIM成像兼具SR-SIM的超分辨优点和OS-SIM的高信噪比光切片能力(图4)。

图3. 实验光路图

图4. iSIM与普通成像、OS-SIM、SR-SIM的成像对比

研究背景

光学显微镜是现代生物医学研究不可或缺的工具。然而,针对生物厚样品的光学显微成像一直是个难题。一方面,显微系统分辨率受到光学衍射极限的限制,最高也只能达到约200nm,不能分辨亚细胞级细节;另一方面,生物样品普遍相对较厚,不仅常常超出显微物镜的景深范围,即使景深范围内的在焦目标也严重受到离焦光线的干扰,导致成像信噪比非常差。针对这个难题,本工作提出了一种光学超分辨与光切片融合的结构光照明显微成像技术(iSIM)。iSIM将现有的超分辨SIM(SR-SIM)和光切片SIM(OS-SIM)这两种技术进行理论和方法融合,突破衍射极限实现了超分辨成像,同时得到了能重构样品三维表面形貌的高信噪比光切片图像。


作者介绍

姚保利 研究员

中国科学院西安光学精密机械研究所

姚保利,中国科学院西安光学精密机械研究所二级研究员,博士生导师,瞬态光学与光子技术国家重点实验室主任,国务院政府特殊津贴专家。1990年毕业于西安交通大学物理系;1997年于中国科学院西安光机所获光学专业博士学位;1997-1998年在德国慕尼黑工业大学做博士后。中国光学学会、中国光学工程学会、陕西省光学学会、陕西省物理学会理事;中国光学学会高速摄影和光子学专业委员会秘书长,中国光学学会生物医学光子学专业委员会常务委员,中国光学学会全息与光信息处理专业委员会常务委员。主要从事超分辨显微成像、光学微操纵、数字全息显微成像、光场调控与矢量光学等方面的研究工作。承担国家自然科学基金重大科研仪器研制项目、重点项目和面上项目,国家重大基础研究计划973项目等20余项科研任务。研制出国内首台具有自主知识产权的结构照明超分辨显微成像系统,分辨率达到90nm同类技术国际最好水平;研发的激光光镊产品成功投放于市场并出口加拿大。在国内外学术期刊上发表论文260余篇,出版专著章节6部,授权发明专利18项。获陕西省科学技术一等奖2项,二等奖1项。获科学中国人2017年度人物、中国科学院王宽诚西部学者突出贡献奖、日本“高速成像奖”。培养的研究生多人获得“优青”、“青千”、“洪堡学者”、“中科院优博”、“陕西省优博”、“中科院院长特别奖”、“诺奖获得者大会最佳海报奖”等荣誉。


期刊介绍

Journal of Physics D: Applied Physics

2019年影响因子:3.169

Journal of Physics D: Applied PhysicsJPhysD,《物理学报D:应用物理》)发表应用物理各领域的前沿研究和综述,具体包括:应用磁学和磁性材料、半导体和光子学、低温等离子体和等离子表面相互作用、凝聚态物理、表面科学和纳米结构、生物物理以及能源等六个领域。文章类型包括原创性论文、研究路线图、通讯以及每年针对热点研究的专题综述和特刊。